猪圆环病毒2型核酸疫苗的构建及其免疫效果

[目的]构建猪圆环病毒2型(pcv2)orf2基因疫苗,并对其免疫效果和安全性进行研究。[方法]将pcv2orf2基因从pmd-orf2*质粒(包含pcv2scha株orf2基因)酶切回收,插入到真核表达载体pcdna-3。1(+)中,构建真核表达质粒pcdna-orf2,对该质粒进行酶切和pcr鉴定。将pcdna-orf2转染ibrs-2细胞,进行westernblotting检测。将构建好的pcdna-orf2制成核酸疫苗,按100μg/只腿部肌肉注射免疫balb/c小白鼠,同时设pcdna-3。1(+),pcv2全毒和pbs为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第14天和56天采血,用elisa法检测抗体；于首免后第56天,采用淋巴细胞增殖试验(mtt法)和流式细胞仪(facs)对小鼠的细胞免疫进行检测。取首免后56d小鼠的心肝、脾、肺、肾和脑等实质器官,采用pcr方法检测pcdna-orf2核酸疫苗的安全性。[结果]westernblotting结果显示,pcdna-orf2构建成功,并在哺乳动物细胞中获得表达。pcdna-orf2核酸疫苗能诱导小鼠产生较强的细胞免疫和体液免疫应答。pcv2orf2基因未整合到小鼠染色体上。[结论]pcdna-orf2可诱导小鼠产生免疫反应,其对小鼠是安全的。