共表达猪瘟病毒e0、e2基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性

[目的]研究共表达猪瘟病毒e0、e2基因的重组鸡痘病毒rfpv-e0-e2的遗传稳定性。[方法]将重组鸡痘病毒rfpv-e0-e2在鸡胚成纤维细胞上连续传20代,取第5、10、15和20代重组病毒进行以下检测:用蓝斑试验鉴定各代重组病毒纯度；用pcr方法扩增猪瘟病毒e0、e2基因,进行基因序列分析；用间接免疫荧光实验检测各代重组病毒中猪瘟病毒e0、e2基因的表达。[结果]各代次重组病毒产生的蚀斑均为蓝色,表明病毒纯度稳定。从各代重组病毒dna中均扩增出了约700bp和1200bp的条带,分别与e0和e2基因片段长度一致,基因序列分析发现,第5、10、15代重组鸡痘病毒中的e0、e2基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有2处发生了点突变(即e0基因139位a→g,e2基因413位a→g),其编码的氨基酸也发生了相应变化(即e0蛋白47位thr→ala,e2蛋白138位glu→gly),但蛋白抗原表位未发生明显的变化。间接免疫荧光实验检测到各代重组病毒均能正常表达目的蛋白。[结论]重组鸡痘病毒rfpv-e0-e2在鸡胚成纤维细胞上传20代以内,具有良好的遗传稳定性,插入的猪瘟病毒e0、e2基因能够正确稳定表达。