米胚芽谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分酶学性质的研究

[目的]分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶(glutamatedecarboxylase,gad),并对其酶学性质进行研究.[方法]通过(nh4)2so4分级沉淀、deae-sephroseff离子交换色谱、superdex200凝胶过滤色谱和glusephrosecl4b亲和色谱等分离纯化技术,对米胚芽gad进行分离纯化.用体积排阻高效液相色谱测定米胚gad的相对分子质量,sds-page测定其亚基的相对分子质量.测定米胚gad的最适温度和ph,通过酶动力学试验测定其动力学常数(km)和最大反应速度(vmax),并测定kcl和mgso4等化学物质对酶活性的影响.[结果]分离纯化得到了米胚gad,其纯化倍数为65.7,比活达223.4u/mg,酶活回收率为10.8%.米胚gad的相对分子质量为78ku,亚基相对分子质量为40ku,说明米胚gad是由2个相同亚基构成的二聚体.米胚gad的最适反应温度为40℃,最适反应ph为5.6;米胚gad的热稳定较差,80℃时酶几乎完全失活;米胚gad在ph4.5～8.0较为稳定,能保持88%以上的酶活.米胚gad对谷氨酸glu的km为32.3mmol/l,vmax为1.159mg/min;对磷酸吡哆醛(plp)的km为1.7μmol/l,vmax为1.171mg/min.k+和ag2+对米胚gad的活力有较大抑制,mg2+、mn2+、al3+和li2+等对活性影响不大,500μmol/lca2+对米胚gad有较强的激活作用.[结论]米胚gad的性质与其他植物gad存在差异.