asiaⅰ型口蹄疫病毒江苏分离株vp1基因的克隆与高效表达

[目的]实现牛口蹄疫病毒asiaⅰ型江苏分离株vp1基因在大肠杆菌中的表达,为vp1蛋白的深入研究奠定基础.[方法]根据genbank公布的asiaⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,fmdv)核苷酸序列(登录号:af030244),设计并合成1对特异性引物,应用rt-pcr方法扩增出牛asiaⅰ型fmdv江苏分离株vp1基因,将其连接人pmd18-t载体,测序后克隆入原核表达载体pet-32a(+)中,构建原核表达载体pet-vp1。阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌bl21(de3),用iptg进行诱导表达,收集表达产物并进行sds-page电泳,利用west-ern-blot分析表达蛋白的抗原性.[结果]牛aisaⅰ型fmdvvp1基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物的相对分子质量约为43ku,并能被牛asiaⅰ型fmdv阳性血清识别,有一定的生物学活性,表达量约占菌体蛋白总量的37.7%.[结沦]牛asiaⅰ型fmdvvp1基因表达成功,且表达产物具有一定的生物学活性.