大鼠胰岛的分离、纯化与评价方法改良

[目的]简化胰岛的分离纯化方法,建立完善的胰岛评价体系.[方法]采用ⅴ型胶原酶分离出sprague-dawley大鼠胰岛,并采用改良的3层dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛.纯化的胰岛通过双硫腙(dithizone,dtz)染色进行计数及纯度检测,丫啶橙(ao)-碘化丙啶(pi)双染色法确定分离细胞的存活率,体外葡萄糖刺激释放胰岛素试验检测胰岛的分泌活性.采用adobephotoshop程序改进了常规的胰岛计数方法,并进行胰岛标准计数.[结果]平均每只成年spraguedawley大鼠的胰腺,可获得(3840±24)当量数(ieq)纯化胰岛,纯度可达到90%,细胞平均存活率达92%.[结论]采用改良的3层dextran不连续密度梯度离心法及基于adobephotoshop程序的标准计数方法,可分别用于大鼠胰岛分离纯化和计数.