溶葡萄球菌素的原核表达及多克隆抗体的制备

【目的】制备溶葡萄球菌素（lys）的多克隆抗体，为检测其在转基因细胞、胚胎及转基因动物中的表达奠定基础。【方法】以含有lys基因成熟肽序列的pepb质粒为模板,经pcr扩增，构建pet28a-ly原核表达载体，并以其转化大肠杆菌bl21（de3）菌株，经iptg诱导表达并纯化蛋白后，常规免疫家兔，制备多克隆抗体；用elisa方法检测抗体效价，westernblot检测抗体的特异性。【结果】构建的原核表达载体pet28a-ly经iptg诱导6h后即可高效表达lys蛋白，蛋白经纯化后，其质量浓度可达到3.05mg/ml；抗体经elisa检测，效价为1∶27000，westernblot检测结果表明，抗体的特异性较好。【结论】成功构建了lys原核表达载体，所制备的lys多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性。