人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建

【目的】利用拟南芥（arabidopsisthaliana）油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21（fibroblastgrowthfactor-21，fgf21），为利用植物油体表达系统规模化生产fgf21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶（pmi）基因作为转基因植物的安全筛选标记，将带有组氨酸标签的人源fgf21基因与大豆油体蛋白基因融合，克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pcambia1390mdo（p1390mdo）上，构建植物双元表达载体p1390mdofgf21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390mdofgf21转入农杆菌gv3101，花粉管导入法转化拟南芥，采用pcr检测、southernblot筛选转基因拟南芥阳性植株(t0)，并对fgf21蛋白在转基因拟南芥种子(t1)中的表达进行westernblot分析。【结果】成功构建了带pmi安全筛选标记的植物双元表达载体p1390mdofgf21。pcr扩增和southernblot分析结果表明，重组fgf21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。bandscand5.0软件和westernblot分析结果显示，fgf21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%，并具有良好的免疫原性。【结论】fgf21融合基因已经转入拟南芥中，并在以pmi为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。