小麦叶片蛋白质组分析中高丰度蛋白rubisco酶的快速去除方法研究

【目的】建立一种小麦叶片蛋白质组分析时去除全蛋白提取物中高丰度蛋白rubisco酶的方法，为富集低丰度蛋白，提高双向电泳灵敏度提供技术支持。【方法】采用分离技术，以铭贤169小麦苗期叶片为材料，使用不同浓度（1,2,5,10mmol/l）的肌醇六磷酸钠，结合二水氯化钙在不同温度（4,20,37℃）去除小麦叶片蛋白中的rubisco酶，筛选去除小麦叶片蛋白rubisco酶的最佳条件，并采用一维凝胶电泳（1-de）、westernblot方法检测去除rubisco酶的有效性，用二维凝胶电泳（2-de）评估该方法对样品在二维凝胶上分辨率的影响。【结果】在37℃条件下，采用10mmol/l肌醇六磷酸钠结合10mmol/l的二水氯化钙去除小麦叶片蛋白中的rubisco酶，可以获得较好的去除效果。在上述条件下作用10min，小麦叶片水溶性蛋白提取物中超过80%的rubisco酶得以沉淀去除，二维电泳图谱上有更多的低丰度蛋白点显现，且水平条纹明显减少，分辨率有所提高。【结论】得到了一种用于小麦叶片蛋白质组分析时去除高丰度蛋白rubisco酶的方法，该方法具有快速、高效、成本低的特点。