茶树咖啡碱合成酶基因cdna在烟草中的表达

为了在烟草中合成咖啡碱,将咖啡碱合成酶(teacaffeinesynthase,tcs)基因cdna全序列克隆到双元载体pbi121中,通过农杆菌叶盘转化法将tcs基因成功转入烟草,结果得到72株转基因烟草植株。对其中3株转基因植株进行pcr检测和pcr-southern检测,证实tcs基因已整合到基因组中;rt-pcr和northern分析显示,tcs在这些植株中均能正常转录。用从转基因植株中提取的粗酶液进行体外酶促反应,能催化7-甲基黄嘌呤和可可碱向咖啡碱的转变,由此表明,转基因烟草植株中能产生具有正常生物学活性的tcs,但从3株转基因烟草中均未检测到咖啡碱。