金黄色葡萄球菌粘附素fnbpa功能区基因的克隆和原核表达

[目的]克隆和表达奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白a(fnbpa)的功能基因.[方法]采集奶牛急性乳腺炎乳样,分离金黄色葡萄球菌,提取其dna作为模板,利用设计合成的特异性引物,对金黄色葡萄球菌进行fnbpa功能基因的pcr扩增.回收目的基因并连接到t载体,鉴定后进行测序,然后将fnbpa基因连接到pet-32a(+)质粒中,经鉴定后转化大肠杆菌bl21感受态细胞,iptg诱导后采用sds-page分析蛋白质的表达情况.[结果]pcr产物经电泳成像,仅金黄色葡萄球菌在1.7kb处出现特异性条带,测序发现其与genbank公布的fnbpa序列的同源性为98%;蛋白诱导表达sds-page分析发现,在80ku处出现特异性条带.[结论]试验成功地克隆到fnbpa基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,蛋白量为33.4%,为进一步研究金黄色葡萄球菌粘附素基因工程疫苗奠定了基础.