禽流感病毒m2e基因与鸡iggfc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达

[目的]得到融合蛋白m2e-fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础.[方法]根据禽流感病毒h5n1的m2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因m2e,然后与鸡iggfc片段基因一起克隆入毕赤酵母表达质粒中,构建酵母表达载体.将阳性质粒线性化后电转化入感受态毕赤酵母x-33中,再经甲醇诱导后,通过tricine-sds-page电泳及western-blotting鉴定融合蛋白.之后用其免疫非免疫鸡,检验其免疫原性.[结果]成功构建了表达m2e和fc融合蛋白的酵母表达载体ppiczαa-m2-fc,并通过zeocin筛选及pcr鉴定出了阳性重组子;阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白,tricine-sds-page电泳及western-blotting鉴定证实,融合蛋白得到正确表达,并且可以与m2e阳性血清反应.动物免疫试验证实,该融合蛋白可以诱导鸡产生抗m2e抗体,具有良好的免疫原性.[结论]融合蛋白m2e-fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达,该融合蛋白具有较好的免疫原性,为后期进行其他免疫试验奠定了基础.