大分子拥挤环境中溶菌酶的去折叠过程

【目的】研究不同大分子拥挤体系对盐酸胍诱导的溶菌酶去折叠过程的影响。【方法】以葡聚糖70（dextran70）、菲可70（ficoll70）、聚乙二醇2000（peg2000）作为大分子拥挤试剂，模拟体内高度拥挤的环境，用荧光相图法研究不同大分子拥挤试剂中，有无还原剂2-巯基乙醇存在时，盐酸胍诱导溶菌酶去折叠过程的变化及其特点，探讨大分子拥挤环境对蛋白质去折叠的影响。【结果】dextran70、ficoll70和peg20003种大分子拥挤试剂对溶菌酶活性几乎没有影响。无大分子拥挤试剂条件下，溶菌酶从天然态转变为去折叠态的过程中（盐酸胍浓度为0～6.0mol/l），当无还原剂2-巯基乙醇时，溶菌酶的去折叠过程符合“三态模型”，有1个中间态；当存在还原剂2-巯基乙醇时，该变性过程则符合“二态模型”，不存在任何中间态，溶菌酶可直接从天然态转变为去折叠态。溶菌酶在大分子拥挤体系中变性时，当不存在还原剂2-巯基乙醇，变性过程符合“四态模型”，存在2个中间态；而当存在还原剂2-巯基乙醇时，变性过程则符合“三态模型”，有1个中间态。【结论】通过添加大分子拥挤试剂，增加了溶菌酶变性过程的中间态，改变了蛋白由天然态到完全去折叠态的变性过程。