幽门螺杆菌空泡毒素p58亚单位在酵母系统中的表达

[目的]构建幽门螺杆菌空泡毒素(vaca)p58亚单位酵母双杂交诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统筛选与空泡毒素p58亚单位相互作用的蛋白奠定基础.[方法]采用pcr方法,从幽门螺杆菌s1/m1型标准毒株nct11637基因组中扩增空泡毒素p58亚单位,经ecorⅰ和bamhⅰ双酶切后克隆入经同样酶切处理的酵母双杂交诱饵载体pgbkt7中,构建pgbkt7-vacap58重组质粒,并将其转化e.colidh5α,提取质粒经bamhⅰ、ecorⅰ双酶切、测序鉴定正确后,转化入宿主酵母菌ah109,色氨酸(trp)缺陷压力筛选,对阳性转化酵母菌扩大培养,提取总蛋白进行western-blot鉴定,同时检测重组蛋白有无毒性、渗漏和自激活活性.[结果]成功扩增长度为1202bp的空泡毒素p58片段,重组质粒pgbkt7-vacap58经bamhⅰ、ecorⅰ双酶切可得到1202bp大小的片段,测序结果显示扩增产物序列与参考序列完全匹配.重组质粒pgbkt7-vacap58成功地转化至酵母细胞ah109中.表达的诱饵蛋白无毒性、无渗漏及无自激活活性,western-blot分析证实酵母菌ah109细胞正确表达了重组蛋白.[结论]成功构建了幽门螺杆菌空泡毒素p58亚单位酵母诱饵表达载体,其可在酵母菌系统中成功表达,且表达产物正确.