含mdvgbctl表位与鸡hsp108融和蛋白基因的构建及原核表达

[目的]为新型马立克氏病(md)疫苗的开发奠定基础.[方法]以spf鸡肝脏中提取rna为模板,利用rt-pcr反应扩增鸡hsp108基因;利用pcr方法扩增mdvgbctl表位基因,并将mdvgbctl表位基因与鸡hsp108融合在一起,构建融合蛋白基因rgbhsp108,将该融合蛋白基因克隆入原核表达载体pet-28a中,构建重组表达载体pet-gbhsp108,将该重组载体转化e.colibl21(de3),并用iptg诱导融合蛋白rgbhsp108的表达,对rgbhsp108进行sds-page电泳、可溶性分析、蛋白纯化及western-blot分析.[结果]扩增到鸡2.4kb的hsp108基因和330bp的mdvgbctl表位基因;克隆的鸡hsp108基因序列与genbank上发表的鸡输卵管hsp108(nm204289)和来源于肝脏hsp108(af387865)核苷酸的同源性分别为99.7%和99.0%.rgbhsp108融合蛋白基因构建成功;融合蛋白rgbhsp108以包涵体的形式获得高效表达并纯化.western-blot分析表明,针对mdvgbctl表位的多抗可以与融合蛋白发生特异性反应.[结论]成功构建了鸡hsp108融合蛋白基因,利用原核表达系统成功表达rgbhsp108.