小麦种子过氧化物酶基因wp1的克隆及在大肠杆菌中的表达

[目的]克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化.[方法]通过rt-pcr从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cdna,构建his-tag和mbp融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.使用直链淀粉亲和层析获得mbp-wp1融合蛋白,并以abts为底物检测酶活性.[结果]获得的wp1基因cdna编码一种358个氨基酸残基的蛋白产物,其序列与大麦bp1相似性高达89%;空间结构预测结果表明,小麦wp1属于第三类过氧化物酶,具有该家族成员典型的血红素和钙离子结合位点;his-tag融合的wp1主要以包涵体形式存在,而mbp融合的wp1主要以可溶形式存在,表达量分别达到总蛋白的18.2%和34.6%;纯化获得的mbp-wp1融合蛋白可检测到过氧化物酶活性.[结论]使用原核系统可高效表达出可溶性的、具有部分活性的wp1蛋白.