猪圆环病毒2型sybr—green1实时荧光定量pcr检测方法的建立

[目的]建立一种能够快速、灵敏地检测猪圆环病毒2型(pcv2)的sybr-green1实时荧光定量pcr方法.[方法]根据已报道的pcv2orf2基因组序列,设计并合成1对引物.通过常规pcr扩增pcv2orf2基因,将鉴定正确的orf2基因片段克隆人ptg19-t载体中,转化大肠杆菌jm109,经pcr及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准晶模板建立sybr-green1荧光定量pcr标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验.[结果]pcv2荧光定量pcr标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系.溶解曲线特异,相关系数为0.9988.最低榆测的拷贝数为1拷贝/25μl,特异性和重复性较好.[结论]建立了检测pcv2的sybr-green1荧光定量pcr方法,为该病的早期诊断及定量分析pcv2感染程度奠定了基础.