慢病毒介导shrna抑制sirt1基因表达对猪前体脂肪细胞凋亡的影响

【目的】探讨慢病毒介导的shrna干扰系统抑制脱乙酰基酶1(sirtuintype1,sirt1)表达对猪前体脂肪细胞凋亡的影响。【方法】构建plentih1-sirt1shrna慢病毒载体，将其感染猪前体脂肪细胞，运用hoechst33258染色，于荧光显微镜下观察细胞的形态学变化；流式细胞术检测细胞凋亡率；western印迹检测细胞凋亡标志物cleavedcaspase-3的表达情况。【结果】plentih1-sirt1shrna慢病毒载体可抑制猪前体脂肪细胞中sirt1的表达，显微镜下可见细胞体积缩小、染色质凝集、核固缩等典型的凋亡特征；流式细胞术显示细胞凋亡率较空载体对照组明显增加，早期和晚期凋亡细胞百分率分别从4%和9%(p<0.05)上升至30%和32%(p<0.05)；western印迹检测显示cleavedcaspase-3蛋白表达水平显著上调。【结论】慢病毒介导的shrna可有效地抑制猪前体脂肪细胞中sirt1的表达，显著促进细胞凋亡，提示sirt1可能在前体脂肪细胞凋亡中发挥着重要作用。