微小隐孢子虫cp16基因真核表达载体的构建及其免疫保护性研究

【目的】构建微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因cp16的真核表达载体pvax1-cp16，并检测其对小鼠的免疫保护效果。【方法】用pcr方法扩增微小隐孢子虫cp16基因，构建其真核表达载体pvax1-cp16，并用脂质体介导法将其转染hela细胞，用间接免疫荧光技术、sds-page及western-blot检测cp16蛋白在转染细胞中的表达情况；分别用真核表达载体pvax1-cp16、pvax1空载体及pbs肌肉注射免疫bailb/c小鼠，共免疫3次，检测血清igg抗体水平及cd4+和cd8+t细胞亚群的变化，并用微小隐孢子虫卵囊感染免疫小鼠（剂量为1×106个/只）,研究真核表达载体pvax1-cp16对隐孢子虫感染小鼠的免疫保护作用。【结果】成功构建了pvax1-cp16真核表达载体；western-blot和间接免疫荧光检测结果显示，cp16基因可以在hela细胞中表达，且表达产物具有反应原性。pvax1-cp16免疫小鼠（试验组）血清中抗体水平及cd4+与cd8+t细胞数目比值升高，与各对照组（pvax1和pbs对照组）相比差异显著(p<0.05)。各组小鼠经口感染微小隐孢子虫卵囊后，试验组与各对照组相比，卵囊排出量均减少了63.97%，持续排出卵囊时间缩短了2d。【结论】构建了微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因cp16的真核表达载体pvax1-cp16，其能刺激机体产生一定的免疫保护作用。