小鼠胚胎干细胞转染条件的优化

【目的】对小鼠胚胎干细胞（mescs）转染条件进行优化。【方法】分别将0.5×105,1×105,2×105,4×105个细胞接种24孔板（各细胞量均接种2孔），培养48h在其细胞融合度分别为30%，50%，70%，90%左右时，分别设置相同的（0.8μgdna/2μl脂质体）和不同的dna/脂质体用量（dna量（μg）/lipo量（μl）分别为0.4/1，0.8/2，1.6/4，3.2/8），采用脂质体（lipofectaminetm2000）转染法，将pegfpn1报告基因载体转染到mescs中，48h后通过荧光观察和流式分析检测各组egfp荧光强度，比较转染效率。【结果】在质粒及脂质体用量相同（0.8μgdna/2.0μl脂质体）的条件下，随着细胞融合度的增加，egfp荧光强度逐渐减弱，在细胞融合度为30%，50%，70%，90%左右时转染，各组egfp阳性细胞率分别为56.4%，51.8%，40.8%和23.3%。提高转染质粒及脂质体量可在一定程度上提高转染效率，但脂质体的细胞毒性也随之增加，不利于细胞生长。【结论】低融合度（30%～50%）条件下，使用0.8μgdna/2.0μl脂质体对mescs进行转染，可获得较高的转染效率（＞50%），同时可维持良好的细胞状态。