西农萨能羊btn基因rna干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定

【目的】构建西农萨能羊btn基因rna干扰的重组腺病毒载体，为研究btn基因的功能和作用机制奠定基础。【方法】设计并合成3对针对btn不同位点的shrna编码序列，克隆到pentr/cmv-gfp/u6-shrna载体中，并与已构建好的表达btn的pdsred1-c1-btn载体共转染hek293细胞，筛选有效的干扰序列。通过与腺病毒骨架质粒重组，制备表达干扰btn基因的shrna的腺病毒，经pacⅰ线性化后，在hek293细胞中包装并扩增病毒，用tcid50法进行病毒滴度测定，获得高滴度的病毒上清液。【结果】成功构建了西农萨能羊btn基因的rnai腺病毒表达载体,腺病毒经包装和扩增后，病毒滴度可达到5×109pfu/ml。【结论】获得了有功能的pad/pl-dest/cmv-gfp/u6-shrna病毒重组子。