稳定表达猪mirnalet-7c细胞株的建立及其对csfv的调控作用

【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pgene-pre-let-7c，建立稳定表达猪mirnalet-7c细胞株，研究let-7c对猪瘟病毒(csfv)复制的调控作用。【方法】利用rna22软件筛选出csfv基因组3′-utr潜在的let-7c结合位点，pcr扩增出let-7c前体片段，连接到表达载体pgenesil-1.1-dbm2上,构建重组质粒pgene-pre-let-7c，采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞（suvec），经g418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验，检测csfv的复制情况。用mtt比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因，并构建了pgene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染suvec细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调csfv在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调csfv的rna复制水平。