猪囊尾蚴mtscl-1基因的原核表达

【目的】探讨原核表达猪囊尾蚴tscl-1蛋白的生物学特性，为研究半胱氨酸蛋白酶(cysteineproteinase,cp)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用奠定基础。【方法】将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶tscl-1基因的pgex-4ttscl-1重组质粒转入大肠杆菌bl21进行表达，诱导后的重组菌裂解上清通过谷胱甘肽（gst）琼脂糖亲和层析法进行纯化，纯化产物利用明胶蛋白电泳法进行活性检测。【结果】经sds-page分析显示，猪囊尾蚴tscl-1基因表达的重组蛋白相对分子质量约为61ku，表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的57.4%。表达产物应用gst琼脂糖凝胶纯化后，纯化蛋白的纯度可达90%以上。明胶蛋白电泳结果显示，纯化蛋白对明胶具有水解活性，并且其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂e-64抑制。【结论】从重组菌中成功表达了目的蛋白，该蛋白具有明显的水解活性，且e-64对其水解活性有抑制作用。