h9n2亚型禽流感病毒ns1基因的原核与真核表达

【目的】构建h9n2亚型禽流感病毒（aiv）ns1基因的原核和真核表达载体，将其分别在大肠杆菌和293细胞中进行表达，为进一步研究ns1蛋白的功能及其与宿主的相互作用，以及鉴定禽流感疫苗免疫禽和野毒感染禽elisa诊断试剂盒的制备提供理论依据。【方法】用rt-pcr方法扩增h9n2亚型aiv的ns1基因，将其定向克隆到原核表达载体pet-32a（+）中构建ns1基因的原核重组质粒，转化大肠杆菌bl21（de3）后，用异丙基硫代半乳糖苷（iptg）诱导表达；同时，将ns1基因克隆到真核表达载体pegfp-c1中，构建ns1基因真核重组质粒，将其瞬时转染293细胞，48h后收集感染细胞,对大肠杆菌表达产物和293细胞表达产物进行westernblotting分析。【结果】成功构建了ns1基因的原核表达载体pet-32a-ns1和真核表达载体pegfp-c1-ns1。western-blotting结果表明，大肠杆菌和293细胞的表达产物均能检测到特异性条带（大肠杆菌的表达产物在约44ku处出现阳性条带，293细胞表达产物在约55ku处出现特异条带）。【结论】ns1基因在大肠杆菌和293细胞中得到成功表达，获得的ns1蛋白具有良好的抗原活性。