奶山羊骨髓间质干细胞的分离培养及生物学特性研究

【目的】分离、培养奶山羊骨髓间质干细胞（mscs），探讨其生物学特性，为心血管、神经退化,尤其是不育症患者的细胞移植治疗及相关细胞发育分化研究奠定基础。【方法】采用贴壁培养法进行mscs的分离和培养，通过形态学观察、生长曲线测定、免疫细胞化学染色和rt-pcr技术等进行检测；并采用免疫细胞化学法对自发分化的细胞及定向诱导分化的神经样细胞、心肌样细胞、生殖样细胞进行检测，计算生殖样细胞的阳性率。【结果】分离得到的mscs为成纤维样细胞，其增殖能力强，无致瘤性，已连续传代至22代；其表达胚胎干细胞（escs）的表面标记oct4、nanog、c-myc和tert；mscs形成类胚体自发分化的细胞表达3胚层特异标志基因afp、β-ⅲtubulin和心肌α-actin；mscs经β-巯基乙醇诱导，定向分化为表达nestin和β-ⅲtubulin的早期神经样细胞,经5-氮胞苷（5-aza）诱导，可定向分化为表达ct3及心肌α-actin的心肌样细胞，并出现肌管样结构，经维甲酸（ra）诱导，分化的细胞表达生殖细胞减数分裂前期的蛋白vasa、scp3和cd49f(α6整合素)等生殖细胞标记，其阳性率分别达到35.7%，24.0%和14.0%。【结论】自奶山羊骨髓分离得到mscs，其具备间质干细胞的基本特性，并具有向神经细胞、心肌细胞、生殖细胞分化的潜能。