猪cdk9基因的克隆及其过表达对suvec细胞周期的影响

【目的】克隆猪细胞周期蛋白激酶9（cdk9）基因，观察该基因过表达对猪脐静脉血管内皮细胞（suvec）周期的影响。【方法】采用电子克隆方法筛选得到猪cdk9基因全长序列，并对其编码的蛋白进行生物信息学分析。利用rt-pcr方法从猪脾脏中扩增出包含完整开放读码框架(orf)的cdk9cdna片段，将其与真核表达载体pegfp-c1连接，构建重组真核表达载体pegfp-cdk9。将pegfp-cdk9以脂质体介导法转染至suvec细胞，采用绿色荧光标记和westernblot检测suvec细胞中cdk9基因的表达，用流式细胞仪检测转染cdk9基因后suvec细胞周期的变化。【结果】得到猪cdk9基因全长1820bp的cdna序列，其orf为1119bp，编码372个氨基酸；cdk9分子质量为42.76ku，等电点为9.04；cdk9基因定位于猪的1号染色体上。酶切和测序结果证明，重组真核表达载体pegfp-cdk9构建成功。pegfp-cdk9转染suvec细胞48h后,荧光显微镜和westernblot检测到目的基因序列在suvec细胞中成功表达；试验组各期suvec细胞比例与空载体组相比，差异无统计学意义（p＞0.05），细胞周期未发生显著变化。【结论】克隆了猪cdk9基因，并在suvec细胞中成功进行了表达。cdk9基因的过表达未引起细胞周期发生显著变化，其可能并不参与细胞周期的调控。