鲤鱼春季病毒血症病毒磷蛋白基因的克隆与原核表达

【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒（svcv）的磷蛋白（p蛋白）基因，并对其进行原核表达，为进一步制备svcv-p蛋白单克隆抗体及建立新的svcv诊断方法奠定基础。【方法】采用rt-pcr方法扩增svcvp蛋白基因，将其克隆入pet-28a(＋)载体中，获得原核重组表达质粒pet28-p，进行原核表达。将该重组原核表达质粒转化至大肠杆菌rosetta感受态细胞中，用0.4mmol/liptg进行诱导表达，用镍亲和层析试剂盒对表达产物进行纯化，分别用sds-page和westernblotting方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了svcv-p蛋白基因，该基因长度为933bp。成功构建了原核重组表达质粒pet28-p，其诱导表达产物分子质量约为37ku；表达的重组p蛋白可被svcv阳性血清所识别。【结论】成功克隆了svcvp蛋白基因，获得了分子质量约为37ku的重组p蛋白。