activina特异性对人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化的促进作用

【目的】研究activina对人胚胎干细胞（hescs）向限定性内胚层（de）诱导分化的促进作用及其信号通路分子，为hescs向de诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hescs中，收集100ng/mlactivina分别诱导0，6，12，24，48，72，96，120h的细胞，用实时荧光定量rt-pcr检测原条标记gsc和mixl1、中内胚层共同前体标记brachyury、内胚层标记foxa2和sox17、中胚层标记flk1、外胚层基因pax6、多能性相关基因oct4与nanog表达水平的变化，用细胞免疫荧光检测brachyury和sox17蛋白表达水平的变化。【结果】在人饲养层（hef）培养体系上，高浓度activina能更快地促进中内胚层基因的表达并提高其表达水平；brachyury和sox17蛋白的细胞免疫荧光检测表明，activina诱导12和48h就可检测二者的表达明显增加，且二者的表达水平分别在诱导48和96h时达到高峰；hescs高效分化为限定性内胚层细胞，de细胞分化率为（81.7±5.4）%，并且体外的内胚层分化过程遵循从原条开始、经过中内胚层共同前体阶段、再到内胚层的发育过程，与体内发育规律相似。【结论】activina能特异性地诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层分化，转录调控brachyury和sox17蛋白的表达。