菌落pcr技术在重组质粒筛选与鉴定中的应用

应用以菌落为模板的聚合酶链反应(pcr)技术,筛选插有酒类酒球菌苹果酸－乳酸酶基因mlea和苹果酸通透酶基因mlep序列的重组阳性克隆，筛选到的阳性克隆分别扩增到约1600bp及900bp的条带，且与两个目的基因片段大小一致。提取阳性克隆的质粒进一步进行双酶切(ecorⅰ-kpnⅰ)及质粒pcr鉴定,证明结果正确。菌落pcr技术的应用使重组质粒的筛选和鉴定得以优化和简化。