猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

猪肌生成抑制素基因myostatin(mstn)的cdna在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列pcr扩增出1.2kb片段,将该片段与pmd18-t载体连接，转化jm109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析，结果表明其与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒dna用带有bamhⅰ和salⅰ内切酶识别序列的另1对引物进行pcr扩增，将回收的1.2kbpcr目的片段定向克隆到pet28a（+）表达载体上，成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建的表达载体阳性克隆在lb液体培养基中用异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(iptg)诱导表达，sds-page凝胶电泳显示,重组菌表达的mstn蛋白是以包涵体的形式表达的；sds-page凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的mstn包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的mstn分子质量为41.4513ku。因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签，用his-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%。