关中奶山羊bac文库构建条件研究

bac(bacterialartificialchromosome，细菌人工染色体)是一种新发展起来的构建高等生物基因组文库的重要方法。由于关中奶山羊产奶性能好，成为制备乳腺生物反应器的理想动物之一，故对关中奶山羊．bac文库的构建条件进行了研究。用bamhi部分酶切关中奶山羊的基因组，用chef(箝位匀强电场)凝胶电泳分离大片段dna。以电透析法回收dna后，与酶切脱磷的pbelobac11载体连接，然后电激转化感受态细胞dh10β,得到了数千个阳性克隆，插入片段平均为30～40kb。在此过程中摸索了bac载体制备、高分子量dna制备、酶切、连接和电激转化等一系列环节对高效转化产生大片段dna克隆的影响。