含ndvf48e9株f基因的mdvcvi988株转移质粒载体的真核表达

为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gb启动子和ndvf48e9株f基因的mdvcvi988株转移质粒载体pus10f转染293t细胞,通过pcr和接免疫荧光(ifa)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有f基因,转移质粒载体已经进入细胞dna;转染转移质粒载体pus10f后的293t细胞所表达的ndvf基因产物抗原性较好,能够与抗ndv的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:dna3μg/ml,转染后48h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以2×105/孔和1×104/孔的转染效果最好。