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西北农林科技大学学报(自然科学版) 2006
猪2型圆环病毒间接elisa检测方法研究, PP. 1-5 Keywords: 猪圆环病毒,orf2基因,大肠杆菌,表达,检测 Abstract: 应用pcr扩增得到猪2型圆环病毒orf2基因的3′端约600bp,该pcv2orf2基因已去除终止子,并分别在其上下游添加kpnⅰ和hindⅲ酶切位点.pcr产物用kpnⅰ和hindⅲ酶切后,与经同样处理过的pbad/gⅲbvector连接,转化top10细胞后挑取阳性克隆,经酶切鉴定和测序验证后用l-arabinose诱导进行融合表达,表达的蛋白主要以包涵体存在。经过镍离子亲和层析柱纯化,sds-page显示1条约28ku的目的条带,纯度达到85%以上。以该28ku的多肽包被酶标板,建立了pcv2的间接elisa检测方法.
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