固始鸡白细胞介素2基因的克隆、表达及其表达蛋白活性的检测

参照genbank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用rt-pcr技术,从经cona诱导的20～35日龄固始鸡脾细胞总rna中扩增出目的片段il-2基因,将其插入到pgem-t载体上,构建了克隆质粒pgem-t-chil-2.测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白细胞介素2基因与genbank上已发表的序列相比,存在2个核苷酸变异.重新设计表达引物,以克隆质粒pgem-t-chil-2为模板pcr扩增表达片段,对表达片段进行hindⅲ和bamhⅰ双酶切,连接到作同样双酶切的pet28a表达载体上,鉴定后转化大肠杆菌bl21并进行iptg诱导表达,然后对表达产物进行sds-page电泳鉴定,结果表明,表达蛋白主要以包涵体的形式存在,表达蛋白分子质量约为18ku;目的蛋白表达量占总量的18%.体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.