高效除磷工程菌pseudomonasputidagm6-ppk1的构建及其除磷能力研究

ppk1基因编码的多聚磷酸盐激酶主要负责多聚磷酸盐的合成，其表达量的高低直接决定聚磷菌的聚p能力的强弱。pseudomonasputidagm6是从ebpr好氧池活性污泥中分离获得的一株具有聚p能力的菌株，该菌株含有两个编码多聚磷酸盐激酶的基因（ppk1和ppk2）。通过pcr从高效聚磷菌株总dna中扩增得到了ppk1及其启动子，并定向克隆到pbbrmcs-5载体上，构建了重组质粒pmepe-ppk，在辅助质粒prk2013的帮助下，通过三亲接合将pmepe-ppk转移到原始菌株gm6中，获得的工程菌p.putidagm6-ppk1。gm6-ppk1除p能力较原始菌株gm6和对照菌株gm6-p5提高了54%，生长能力较原始菌株也有一定增强。通过模拟ebpr工艺，发现gm6-ppk1在厌氧/好氧交替的环境条件下强化表达不但提高了菌体好氧段的吸p能力，而且厌氧段p的释放和pha的合成较之原始菌株也有显著增加。