含绿色荧光蛋白及trp3iar基因的草菇表达载体的构建

分别用限制性内切酶ecori和hindiii酶切质粒pbgghg,将切下的含双孢蘑菇gpd启动子、egfp基因和35s终止子的碱基序列连接到含ap抗性的pbskii上,再将这一段序列切下连接到含kan抗性的pcambia1300载体上,形成中间质粒载体yh2873。用限制性内切酶hindiii分别酶切质粒yh2873和质粒pdb06,将从pdb06切下的trp3iar基因连接到中间质粒载体yh2873上,得到表达载体psagf。中间载体pyh2873经限制性内切酶ecori和hindiii酶切,电泳后显示1.3kb的目的片断和9kb的载体片断,表达载体psagf经限制性内切酶hindiii酶切,电泳后显示4kb的trp3iar基因的目的片断和10kb的载体片断,进一步测序证明重组质粒连接正确,成功构建了草菇的表达载体psagf。