“细菌型”pepc2基因反向表达载体构建及在莱茵衣藻中表达

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxylase,pepc,ec4.1.1.31)在植物碳代谢中处于代谢纽的关键位置，是调节细胞蛋白质和脂肪酸含量的关键酶，通过抑制pepc基因的表达，可以提高细胞的含油率。通过克隆莱茵衣藻“细菌型”pepc2基因的部分序列（简称crpepc2）和莱茵衣藻融合启动子hsp70a-rbcs2（简称hr），将hr和crpepc2片段插入psp124s中，获得crpepc2反向表达的莱茵衣藻高效表达载体psp124s-hr-reve-crpepc2。利用基因枪将psp24s和psp124s-hr-reve-crpepc2分别转入莱茵衣藻cc-503藻株，得到空质粒型和反向型突变藻株。利用qpcr检测莱茵衣藻野生型、空质粒型和反向型藻株“细菌型”pepc2基因的相对表达量，结果表明空质粒的导入对莱茵衣藻pepc2基因的相对表达量影响很小，为野生型的92.95%；而反向型pepc2基因的导入明显降低了莱茵衣藻pepc2基因的相对表达量，仅为野生型的2.94%。该结果一方面说明我们建立了利用qpcr快速检测莱茵衣藻pepc2基因相对表达量的方法，另一方面也证明利用crpepc2反向表达的方法（即“反向载体技术”）可以有效的抑制莱茵衣藻pepc2基因的表达，为进一步筛选稳定的含油量高的藻株奠定了良好的基础。