黑龙江镜鲤基因组dna文库的构建

纯化镜鲤体组织的高分子量基因组dna,经限制性内切酶sau3aⅰ部分消化后,10％-40％蔗糖密度梯度离心分离并回收9—23kb的dna片段。以λdashⅱ为克隆载体,与9—23kb的dna片段进行连接和包装,构建了镜鲤的基因组dna文库。随机选取5个独立的噬菌斑,提取dna后用ecorⅰ与bamhⅰ进行酶切分析,证明克隆插入率为100％。经测定,该文库的滴度是108pfu/ml,根据公式n=ln(1-p)/in(1-f),99％的镜鲤基因组包含在该基因组文库中。以鲤igf-ⅱ基因探针对该基因组文库进行southem杂交,筛选到相关的阳性克隆,证明这是一个较为完整的镜鲤基因组dna文库。