绿色荧光蛋白在igf2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记效果

以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行pcr扩增得到目的基因(greenfluorescenceprotein,gfp)，然后加上酶切位点bamhi和nhei，构建plenti6.3iresegfp载体，转染dh5α感受态细胞进行菌落pcr，取阳性进行酶切鉴定，再取呈阳性的质粒进行测序，使用浓度为1μg/μl的质粒与慢病毒表达载体进行连接，通过荧光显微镜观察到绿色荧光，表明本实验获得的gfp和慢病毒载体整合成功；用此转染293t细胞，通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取rna，然后按照fermentas公司的mmlv操作说明书进行反转录，得到igf2b基因后加酶切位点进行扩增，将igf2b整合到用gfp作为标记基因的慢病毒载体上，再以此转染建鲤未分裂的受精卵，48h后通过荧光显微镜也观察到了绿色荧光蛋白的表达。试验表明绿色荧光蛋白在igf2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记是成功的。这些结果为基于含有gfp慢病毒转基因鱼育种技术的开发奠定了基础。