巨核酸酶i-scei转基因元件的构建及其在斑马鱼中转基因效率的评估

巨核酸酶i-scei是由酿酒酵母线粒体中核糖体大亚基上的ⅰ型内含子编码的一种核酸内切酶,近年已被应用于转基因研究中。i-scei介导的转基因大多是将i-scei蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵,但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大,直接用i-scei的mrna代替蛋白进行注射更为简捷。本研究应用i-sceimrna介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植,进一步了解其转基因效率。首先设计合成带有巨核酸酶i-scei编码序列的辅助质粒(pcs2-i-scei),并分别构建了带有巨核酸酶i-scei识别位点、ef1α启动子和荧光蛋白基因(egfp/rfp)编码序列的供体质粒pi-scei-ef1α-egfp/rfp。辅助质粒pcs2-i-scei体外转录成mrna,以50ng/μl供体质粒和100ng/μl的i-scei巨核酸酶mrna共注射到斑马鱼(daniorerio)受精卵中,注射后48h的斑马鱼egfp的平均荧光表达率可达75.86%。在斑马鱼的头部、躯干到尾部均可观察到荧光蛋白的表达,且随着胚胎发育,荧光信号逐渐增强。结果表明i-scei系统在斑马鱼中可介导较高效率的转植,具有在经济鱼类转基因研究中应用的潜力。