黄曲酶尿酸氧化酶突变体的构建、表达、纯化及生物学活性分析

采用融合pcr的方法将黄曲霉尿酸氧化酶(uox)基因的307~309bp的tgc(cys)突变为gcc(ala)，将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pet-42a(+)后转化大肠杆菌bl21(de3)。经iptg诱导，突变体蛋白(uox-ala103)得到高水平的可溶性表达，目的蛋白占总蛋白含量的45％。疏水柱及阴离子柱纯化后，uox-ala103蛋白纯度＞98％。westernblotting分析证实uox-ala103能与抗uox单抗特异结合。与天然型相比较，其体外生物学活性增加约60％，在高尿酸血症小鼠模型体内也有良好的降解尿酸的活性。