重组人粒细胞集落刺激因子cdna在哺乳动物细胞中高效表达的研究

利用pcr反应、dna测序、基因重组等技术，构建了两个表达人粒细胞集落刺激因子cdna的重组质粒ped－gcsf和pef－gcsf，两质粒分别转染cos7细胞作瞬时表达，转染cho－dhfr－细胞作稳定表达。结果两质粒在cos7细胞和cho细胞均获得了表达，ped－gcsf转染cos7细胞48h、72h的表达量分别为5.2×104pg/ml和2.3×105pg/ml，pef－gcsf转染cos7细胞后48h、72h的表达量分别为2.8×105pg/ml和1.4×105pg/ml。转染cho－dhfr－细胞，随着加入的氨甲喋呤(mtx)浓度升高，cho－dhfr+克隆数减少，但平均每个克隆的rhg－csf表达量升高，在0.5μmol/lmtx下最高表达rhg－csf细胞株的量是4.46μg/ml/3d。且表达的rhg－csf注射小鼠腹腔可提高小鼠外周血白细胞的数量。