大肠杆菌-链霉菌穿梭载体的构建及应用

pij6021和pij4123是链霉菌的高拷贝表达载体，它们携带有受硫链丝菌素诱导的强启动子ptipa。分别在它们的合适位点插入大肠杆菌质粒的复制子和在大肠杆菌中选择用的抗性标记基因(bla)，得到了两个能在大肠杆菌和链霉菌中穿梭复制、并保持结构稳定的链霉菌表达载体：phz1271和phz1272。将透明颤菌(vitreoscilliasp.)血红蛋白基因(vhb)克隆到phz1272中，用它转化变铅青链霉菌(streptomyceslividans),经westernblotting分析和co结合实验表明，在变铅青链霉菌中表达出了有生物活性的透明颤菌血红蛋白，从而证明所构建的phz1272载体具有在链霉菌中表达外源基因的功能。