pbr322-red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用

pbr322-red是一种新型重组工程系统,它携带了λ-噬菌体red重组酶基因和一系列调控元件。对pbr322red最优重组条件进行探索后应用该质粒提供的体内同源重组功能,在菌株w3110体内,对染色体上的lac操纵子进行了基因修饰,包括:①运用kan-sacb选择反选择方法和重叠引物方法敲除了阻遏基因laci,②运用kan-sacb选择反选择方法和线性双链dna介导的dna重组方法将报告基因lacz敲入laca和lacy的位置,并且首次测定了报告基因lacz在这三个结构基因位置的组成性表达情况。结果表明运用不同的重组策略,pbr322-red系统都能方便有效地对大肠杆菌w3110染色体进行基因敲除和敲入修饰。