sars-cov单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

参照已发表的sars冠状病毒bj01株基因序列,利用计算机软件预测并选取该病毒s、m、n三种主要结构蛋白部分抗原性优势区域,以编码gly-pro-gly序列相连接合成两段嵌合基因a和b。并分别克隆于pgex-6p-1载体上用iptg进行诱导表达,以纯化的嵌合蛋白a和b为抗原,分别免疫balbc小鼠制备单克隆抗体。利用单克隆抗体亚型检测试剂盒和sarscov商品化elisa检测试剂盒对其进行亚型和特异性鉴定。结果表明融合表达两段嵌合基因产物,其大小分别为34kd和35kd,westernblot分析证实两种表达产物都能被sars病人康复期血清所识别。获得了6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞克隆株。亚型鉴定结果除d3c5为igg2a外其他单抗均为igg1,而且所有单抗的轻链均为κ链。特异性鉴定发现除d3d1外,其余的5株单抗均能与sarscov商品化elisa检测试剂盒发生特异性反应。将d3d1与灭活后经超声波裂解的sarscov进行westernblot分析,发现它能特异性识别180kd的蛋白带。分别融合表达了6个s蛋白的寡肽(s1-s6),并对筛选出的单克隆…