胸膜肺炎放线杆菌毒素apxiva基因的克隆与表达及间接elisa方法的建立

参照app血清1型apxiva基因序列合成了一对特异性引物,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌(app)血清2型中扩增了apxiva基因5′端2445bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pet-28b的t7启动子下游,与6×histag融合,再转化大肠杆菌bl21(de3),在iptg的诱导下表达大小约90kd的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在,且能与app标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接elisa方法(apxiva-elisa),特异性良好。用apxiva-elisa检测猪胸膜肺炎三价(1、2和7型)灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性,而1、2、7型app活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明,apxiva-elisa不仅可以用于检测所有血清型app的抗体,而且还可以用于app自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。