禽流感血凝素基因的原核表达及其在h9亚型诊断中的应用

根据h9n2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物,从本室分离并保存的h9n2亚型禽流感病毒中扩增了预计约1683bp的血凝素基因,将此扩增产物克隆进pmd18-t载体,限制性酶切及序列测定后,进一步将其亚克隆到pgex-kg中,与gst蛋白融合表达。sds-page和western印迹表明缺失信号肽后的ha基因在大肠杆菌中获得了表达,表达产物具有免疫学活性,融合蛋白的分子量约为90kd,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,利用复性产物作为抗原包被酶标板建立了检测h9亚型禽流感抗体elisa方法。结果表明应用ha重组蛋白作为诊断h9亚型禽流感抗原具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于h9亚型禽流感抗体的检测。