以重组tace胞外功能域从噬菌体随机肽库中筛选tace的抑制肽

肿瘤坏死因子转换酶(tace)是加工裂解tnf-α前体的关键酶,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到tace的抑制肽,首先制备筛选靶分子,用rtpcr从人外周血单核细胞中分别扩增出tace的催化区(t800)和整个胞外区(t1300),然后分别克隆至pet-28a和pet-28c中,转化大肠杆菌bl2-1(de3),经iptg诱导表达出带有his-tag的目的蛋白,两者均为包涵体,变性复性后过ni2+-nta亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白。以纯化的重组t800和t1300分别筛选噬菌体展示随机15肽库,对筛选克隆进行elisa检测、竞争抑制实验和序列分析。从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列“trwlvyfsrpylvat”,固相fmoc法合成该短肽,观察其在lps诱导人单核细胞产生stnf-α中的作用。结果表明,筛选到的短肽可显著抑制tace的活性,减少tnf-α的分泌,抑制率可达60.3%,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据。