潮霉素和新霉素抗性基因转基因小鼠的建立及其表达研究

建立潮霉素(hygromycin,hyg)和新霉素(neomycin,neo)抗性基因转基因小鼠系,以获得两种抗性基因同时表达的小鼠胚胎成纤维细胞(mefs),为条件性基因剔除或小鼠胚胎干细胞克隆的筛选创造条件。将ptkhygrpa,pgkneorpa两个转录单元分别克隆至pbluescript载体中获得hygrneor双抗性基因表达质粒,以kpnⅰ和xbaⅰ双酶切,回收4245bp串联基因片段,经显微注射获得hygrneor转基因小鼠。pcr及southernblot鉴定转基因小鼠基因型;rtpcr检测hygr、neor基因在转基因阳性小鼠组织及mefs中的表达。经显微注射共获得7只转基因阳性小鼠(founders,g0代),经交配繁育,建立了6个转基因小鼠系。rtpcr检测其中5个转基因阳性小鼠系f1代杂合子成年雌性小鼠肝脏、卵巢组织中hygr、neor基因的表达,发现hn30,hn33,hn66和hn67系阳性小鼠的1种或2种组织中有hygr、neor的表达;rtpcr检测发现hyg和neo抗性基因在从hn30和…