hivgp41七肽重复区五螺旋蛋白的高效表达及对病毒融合的抑制

人工构建的五螺旋蛋白(5-helix)能抑制人类免疫缺陷综合症病毒(hiv)介导的膜融合过程中发卡三聚体的形成,从而抑制病毒感染靶细胞。但5-helix基因在原核细胞中直接表达时易形成包涵体,复性困难,给研究带来不便。本研究探讨了将蛋白结构模拟用于寻找合适的表达载体的方式:通过同源建模,模拟了5-helix在pgex-6p-1载体及pet44b载体上的融合蛋白形成的最有可能的2种构象。通过对比发现其在pet44b载体中与nusa的融合蛋白的溶剂化能远大于其在pgex-6p-1中与gst融合蛋白的溶剂化能,且酶切位点位于蛋白表面。应用pcr将5-helix基因从pgex-6p-1-5h克隆出来,鉴定正确后连接到pet44b载体上,构建成重组载体pet44b-psp-5helix。将重组载体转化入大肠杆菌bl21(de3),于不同温度诱导表达。用镍柱及gst柱纯化蛋白,sds-page证实成功得到了目的蛋白。用纯化蛋白验证抑制hiv假病毒感染ghost-cxcr4的活性。结果显示:与nusa融合的5-helix蛋白能够实现高效的可溶表达,且酶切容易;纯化蛋白抑制hiv假病毒感染ghost-cxcr4的半数抑制浓度为(22.77±5.64)nmol/l,为进一步探讨其在hiv-1病毒感染中的应用奠定了基础。