极细链格孢菌peat1基因在毕赤酵母中的表达与功能分析

建立了在毕赤酵母(pichiapastoris)中分泌表达peat1蛋白的技术。将来源于极细链格孢菌(alternariatenuissima)的基因peat1亚克隆至酵母分泌型表达载体ppic9k,构建了重组表达载体ppic9k-peat1,分别用sali或bglii酶切线性化后电击转入毕赤酵母gs115菌株中,经md平板筛选、pcr鉴定获得整合有外源基因的重组菌株。在a-factor及aox1基因启动子和终止信号的调控下,peat1在酵母中大量表达并分泌到胞外,sds-page检测表明表达蛋白的表观分子量约为35kd。表达蛋白上清稀释液能诱导烟草产生对tmv的抗性,其枯斑数抑制率可达到30.37%。每升表达上清液经超滤浓缩和离子交换层析可纯化目的蛋白16.13mg,该纯化蛋白能显著地促进小麦幼苗的生长。